elisa间接法的原理是 elisa一步法两步法原理

1、ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

2、液相阻断ELISA的原理和步骤 ELISA原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。液相色谱仪：色谱分离基本原理：在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。高压输液泵功能驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；性能要流量稳定（±mpa），耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；种类往复泵和隔膜泵。色谱柱功能分离样品中的各个物质；尺寸～mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；填料粒度5～μm，高效粒固定相；进样器功能将待分析样品引入色谱系统；种类①注射器，mpa以下，1～μm量注射器进样②停流进样③阀进样，常用、较理想、体积可变，可固定④自动进样器，有利于重复操作，实现自动化检测器功能将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信；分类①示差折光化学检测器②紫外吸收检测器③紫外一可同分光光度检测器④二极管阵列紫外检测器⑤荧光检测器⑥电化学检测器馏分收集器功能如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的；方法①手工，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。②馏分收集器收集，比较理想，机控制操作准确。数据获取和处理系统功能把检测器检测到的信显示出来气相色谱仪： gc主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离，其过程如图气相分析流程图所示。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信，而电信的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信放大并记录下来时，就是气相色谱图了。（1）载气系统气相色谱仪中的气路是一个载气连续运行的密闭管路系统。整个载气系统要载气纯净、密闭性好、流速稳定及流速测量准确。（）检测系统检测器的作用是把被色谱柱分离的样品组分根据其特性和含量转化成电信，经放大后，由记录仪记录成色谱图。（5）信记录或机数据处理系统近年来气相色谱仪主要采用色谱数据处理机。色谱数据处理机可印记录色谱图，并能在同一张记录纸上印出处理后的结果，如保留时间、被测组分质量分数等。（6）温度控制系统用于控制和测量色谱柱、检测器、气化室温度，是气相色谱仪的重要组成部分。液相阻断ELISA其实就是将抗体（兔抗血清）包被在ELISA板中，于此同时将待检血清做几个稀释度和已知抗原在反应板中反应；h；然后弃液，洗板，加入一定量的一抗（豚鼠抗血清），与所剩抗原结合，°分钟左右，加入终止液读数。

3、HRP（辣根过氧化物酶）标记抗体的原理及操作流程是什么具体怎么弄【elisa间接法的原理是 elisa一步法两步法原理】 HRP标记抗体的方法酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。戊二醛二步法 1. 原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶戊二醛免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤 (层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在ml，则以PEG浓缩至)，搅拌下逐滴加入酶溶液中。(?小时。() 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置) rpm离心分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。3. 结果判定 (cm) 。酶量(mg／ml)＝ODnm×)×× 酶量(mg／ml) IgG量(mg／ml) 酶量克分子比值＝———————— ÷ ——————— ＝ ——— × ,～4％的酶与蛋白质结合。4. 试剂及器材 ( ) ％戊二醛液：取M ：取M碳酸氢钠) PBS及生理盐水。() 。(层析柱(cm) 。() 搅拌器，分光光度计，离心机。() 透析袋，大、小烧杯，试管，吸管等。

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