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GPC原理 GPC测定原理

生活经验知识分享

1、高分子物理学科里 采用GPC法测量 可以得到聚合物那些结构信息？   主要是聚合物的分子量和分子量分布的信息 。你好！ 平均分子量和分子量分布，多分散系数 。当然也能得到GPC谱图 。仅代表个人观点，不喜勿喷，。相对分子质量及其分布、流体力学体积、多分散系数等

2、GPC测定分子量为什么属于间接法   GPC是通过测定已知分子量的标样分子量与流出时间的关系，即建立起Mn与流出体积之间关系式，再通过测定待测样的流出时间来得到待测样的分子量 。因而是间接法 。gpc测定分子量是通过柱子时候根据分子的分子大小进行出峰的，分子量大的比较早出峰，也就是说分子比较大的物质在gpc柱子上不能通过，通不过的分子就被检测出来出峰，根据出峰的情况和标准测定液体分子量相对比得到近似的分子量；这个分子量不是绝对的，这是因为gpc测定的实际上是分子的大小而不是分子量得大小，当然也可以近似认为分子大的分子量大；究竟他们的关系如何，用gpc就不能确定了，只能通过标准液体的分子量来进行对比，这个结果是相对的，不是绝对的 。

3、HPLC仪的工作原理是什么？   高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（′Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测 。特点 ×Pa 。h。3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高 。：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度 。如荧光检测器灵敏度可达g 。另外，用样量小，一般几个升 。：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析 。而高效液相色谱法，只要试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制 。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 % ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析 。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占% 。高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型 。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似 。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行 。高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型： 1 ．液 — 液分配色谱法(Liquidliquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体 。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面 。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配 。达到平衡时，服从于下式： 式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm溶质在流动相中的浓度； s—固定相的体积；m—流动相的体积 。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大 。a. 正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性 。b. 反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性 。c. 液 — 液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要完全不同，但固定液在流动相中仍有量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失 。上世纪%） 。2 ．液 — 固色谱法 流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等） 。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的 。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表示如下： Xm nSa ====== Xa nSm 式中：Xm流动相中的溶质分子；Sa固定相中的溶剂分子；Xa固定相中的溶质分子；Sm流动相中的溶剂分子 。当吸附竞争反应达平衡时： K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中：K为吸附平衡常数 。[讨论：K越大，保留值越大 。] 3 ．离子交换色谱法(Ionexchange Chromatography) IEC是以离子交换剂作为固定相 。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离 。以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下： X(溶剂中) (树脂R4NCl)=== (树脂R4N X) Cl (溶剂中) 当交换达平衡时： KX=[R4N X][ Cl]/[R4NCl][ X] 分配系数为： DX=[R4N X]/[X]= KX [R4NCl]/[Cl] [讨论：DX与保留值的关系] 凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离 。4 ．离子对色谱法(Ion Pair Chromatography) 离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为 。其原理可用下式表示： X水相 Y水相 === XY有机相 式中：X水相流动相中待分离的有机离子（也可是阳离子）；Y水相流动相中带相反电荷的离子对（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；XY形成的离子对化合物 。当达平衡时： KXY = [XY]有机相/[ X]水相[Y]水相 根据定义，分配系数为： DX= [XY]有机相/[ X]水相= KXY [Y]水相 [讨论：DX与保留值的关系] 离子对色谱法(特别是反相)发解决了以往难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离 。5 ．离子色谱法(Ion Chromatography) 用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相 。以电导检测器为通用检测器，为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了抑制柱 。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同 。以阴离子交换树脂（ROH）作固定相，分离阴离子（如Br）为例 。当待测阴离子Br随流动相（NaOH）进入色谱柱时，发生如下交换反应（洗脱反应为交换反应的逆过程）： 抑制柱上发生的反应： RH NaOH === RNa H2O RH NaBr === RNa HBr 可见，通过抑制柱将洗脱液转变成了电导值很小的水，消除了本底电导的影响；试样阴离子Br则被转化成了相应的酸HBr，可用电导法灵敏的检测 。离子色谱法是溶液中阴离子分析的最佳方法 。也可用于阳离子分析 。6 ．空间排阻色谱法(Steric Exclusion Chromatography) 空间排阻色谱法以凝胶 (gel) 为固定相 。它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径比分子筛要大得多，一般为数纳米到数百纳米 。溶质在两相之间不是靠其相互作用力的不同来进行分离，而是按分子大小进行分离 。分离只与凝胶的孔径分布和溶质的流动力学体积或分子大小有关 。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过 。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上最后出现 。高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、．分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点 。1．进样系统 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的 。这对提高分析样品的重复性是有益的 。2．输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分 。高压泵的一般压强为l．XPa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的 。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等 。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离 。该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等 。色谱柱一般长度为～mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物 。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性 。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来 。另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应 。基质粒度小，孔浅，样品在孔区内传质短 。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的 。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大 。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理 。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率 。4．检测系统 高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种 。（1）紫外检测器 该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测 。其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为g／ml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品 。（2）示差折光检测器 凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测 。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统 。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为7g／ml），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测 。（3）荧光检测器 凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比 。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为～g／ml），痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用 。（5）数据处理系统 该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展 。参考资料：

4、求助：制备GPC是什么？与一般的分析GPC有什么区别？   GPC指的是凝胶液相色谱 。制备型的当然从柱子，泵，以及检测器都要与分析型的有所区别~ 就是利用分子量不同用于分离制备样品的GPC，与分析型相比样品量达很多，所以泵柱子都不同

5、gpc的分离机理与气相色谱的分离机理有什么不同   GPC分离是和化合物的分子量有关系的，分子量大化合物从柱子内的粒子间隙穿过的出的快，分子量小化合物进入粒子内的通道被吸附出的慢，最终是大分子先出峰，小分子最后才出来 。GC分离是和化合物的沸点和极性有关系的，通常低沸点的化合物由于先被汽化进入色谱柱，理论上是先出峰的，但是色谱柱的固定相会对极性相似的化合物有吸附力，使得极性相似的化合物在柱子被保留的时间较长，而极性相斥的化合物通常很快就从柱子流出了 。出峰顺序通常是在极性柱里：极性弱的低沸点化合物极性弱的高沸点化合物极性强的低沸点化合物极性强的高沸点化合物 。在非极性柱里：大致按沸点的由低到高顺序出峰，同沸点的非极性如烷烃分子保留时间较长晚出峰，极性的分子保留时间较短先出峰 。我不会~~~但还是要笑~~~：）
6、GPC凝胶色谱数据分析   排阻色谱的分辨率是很低的 。不知道你的样品是不是蛋白质、多肽类的？如果是的话，一般都在4个峰，当然这些峰都是混合物 。另外，相信你也明白，排阻依据的不仅仅是分子量，分子形状（次级结构）影响也很大 。再有，色谱条件的影响也不容忽视，你会发现柱子很容易被污染，同一个样品，第2次就可能出个新的肩峰；洗脱情况对流动相的盐浓度、离子强度、pH的变化也很敏感 。这是一点体会了，共参考 。如果要想得到更多的样品信息，有两个建议：一是做HPCE，二是做RPHPLC 除了想知道平均分子量还要知道分子量分布吗？如果不是的话可以用核磁的数据来算啊 。而且一般gpc做出来的分子量要比其他方法做出来的偏高，你买来的东西想和其他高分子作反应的话，最好是另外的材料你用什么方法测分子量，这个材料也应同样的方法测试，不然误差挺大的 。我曾经比较过粘度、核磁gpc的数据，差距很大，所以做好选择你平常就方便做的测试数据来作为你的计算依据aaronwang: 为什么一定要做gpc呢？除了想知道平均分子量还要知道分子量分布吗？如果不是的话可以用核磁的数据来算啊 。而且一般gpc做出来的分子量要比其他方法做出来的偏高，你买来的东西想和其他高分子作反应的话，最好是另外 ... 不同的测试方法得到的分子量没有可比性sunjy:dkidkix(站内ta)pei一般gpc测不出来lexwell(站内ta)你从购买的pei一般都有编和分子量的，这个你可以到的网站上去查 。
【GPC原理 GPC测定原理】

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