1、在5升三角烧瓶中 ， 把2250克醋酸酐，在水浴上温热至35到40摄氏度 。
2、换用25到30摄氏度的水浴，在搅拌下一小时内滴入过氧化氢、百分之三十到百分之三十五，500克 ， 维持温度在40摄氏度以下 。在室温放置过夜，所得溶液中含过氧乙酸浓度百分之六到百分之九 。
3、若需要浓度高的过氧乙酸溶液，可用下法制备：
【过氧乙酸的配制方法】在10克冰醋酸和0.11毫升浓硫酸的混合液中，边搅拌边加入9、1克百分之九十的过氧化氢，温度维持在22到23摄氏度 。放置4小时后，过氧乙酸含量可达百分之四十四，12到15小时后后达百分之四十六 。
