机动车驾驶员实习期内开车上高速不一定会被处罚 。
驾驶员在实习期内是可以上高速的，但应当由持相应或者更高准驾车型驾驶证三年以上的驾驶人陪同 。无驾驶员陪同或陪同驾驶员不符合要求的，将被处200元罚款 。
法律依据：
《机动车驾驶证申领和使用规定》
【实习期上高速有什么后果】驾驶人在实习期内驾驶机动车上高速公路行驶，应当由持相应或者更高准驾车型驾驶证三年以上的驾驶人陪同 。陪同的驾驶人应乘坐在副驾驶位置，对实习驾驶人进行指导 。无驾驶员陪同或陪同驾驶员不符合要求的，将被处200元罚款 。
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