1、切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构建 。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子 。
【基因表达载体的构建】2、通过载体把目的基因片段导入活细胞 。构建基因表达载体也就是把目的基因和载体连接，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用 。
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