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免疫共沉淀抗原设计原理 免疫共沉淀抗原设计原理

生活经验知识分享

1、请问高手，免疫共沉淀中protein A 琼脂糖珠的作用原理？谢谢   prorein A或者 Protein G能特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段，所以能和抗体结合，抗体和你的目标蛋白结合，目标蛋白和相互作用的蛋白结合 。你好！ protein A 可以特异性的和IgG结合 。希望对你有所帮助，望 。
【免疫共沉淀抗原设计原理 免疫共沉淀抗原设计原理】
2、免疫共沉淀名词解释   冷沉淀和冻干人凝血因子八的成分不同，但都是甲型血友病人用药，冷沉淀是不是报销要看当地的政策 。免疫共沉淀（CoImmunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法 。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法 。欢迎追问，

3、什么是免疫共沉淀？和免疫沉淀有啥区别   免疫共沉淀基于抗原抗体特异性结合的原理，体外验证两种分子之间是否存在相互作用的技术 。它是免疫沉淀的延伸 。基本原理是在含有已知抗原的细胞裂解液中，将已知抗原作为靶蛋白，检测裂解液中可能存在与之有相互作用的蛋白 。加入特定的抗体以及Protein ABeads，会形成“抗原抗体Protein ABeads”的复合物 。在抗原抗体特异性结合沉淀靶蛋白的同时，存在相互作用的蛋白也能被沉淀下来，最终得到“蛋白蛋白”的复合物 。验证是否有相互作用蛋白的存在 。免疫沉淀与免疫共沉淀实验原理及方法大致相似，所不同的是在免疫共沉淀中对靶蛋白的结合由另一个与之发生相互作用的蛋白所替代 。因此实验属于IP还是CoIP取决于实验的目标是目的抗原还是相互作用蛋白质 。如果说区别的话，免疫沉淀是单一的特异性抗体结合其对应抗原，使之聚集沉淀 。免疫共沉淀是a抗体结合a抗原，b抗体结合b抗原，如果a抗原能与b抗原相互作用而结合的话，最终aabb都连在一起沉淀，检测方法可以使用ab在一起激发荧光，分开无荧光，所以当检测到荧光则说明ab有相互作用，无则没相互作用，也可使a固定在固相载体，检测b，若检测到b则ab有相互作用，若没检测到则无相互作用 。基本来说免疫沉淀是看有没有抗原抗体结合，免疫共沉淀则是看两个抗原有无相互作用 什么是免疫共沉淀？和免疫沉淀有啥区别 免疫共沉淀的缺点： （1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用； （2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； （3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性 。（4）灵敏度没有亲和色谱高 。免疫共沉淀： 免疫共沉淀（CoImmunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法 。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法 。

4、免疫沉淀反应中沉淀线的形成原理？？   一般来说，单个抗体与抗原有多个与抗原或抗体结合的位点 。在抗体、抗原浓度适宜的情况下，抗体、抗原相互偶联，形成大分子复合物，宏观上看到的就是白色沉淀线 。，凝集反应：颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合，在一定条件下产生肉眼可见的凝集，称凝集反应分两类 。：如肥大氏反应、abo血型鉴定等；：将可溶性抗原先吸附到与免疫无关的胶乳颗粒或红细胞上再与相应的抗体结合出现肉眼可见的反应 。沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合后形成肉眼可见沉淀物的现象 。一般在抗原抗体分子可以自由扩散的固体状琼脂凝胶中进行，抗原抗体在比例合适处结合，形成较稳定的白色沉淀线 。分以下几种：单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊 。免疫比浊： 在一定量的已知抗体中分别加入递增量的抗原，经一段时间反应后用浊度仪测量抗原抗体沉淀物的浊度，浊度与抗原浓度呈正比 。沉淀线的应用，一般是用单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳试验中，抗原抗体结合的一个重要特点是，特异性按比例，当抗原抗体比例合适的时候，就会在我们使用的琼脂板上形成肉眼可见的清晰的沉淀线，一般用作一些如补体、免疫球蛋白、还有某些肿瘤因子的的检测 。

5、免疫共沉淀中proteinA/G的工作原理？Western blot中封闭原理   不知道你所说的ProteinA / Protein G 是偶联了beads的吗？ 如果是：用来结合抗体的 。如果不是：一般用来在加入抗体之前的封闭，当然也可以用来结合抗体的 。我说下个人理解，我认为加入ProteinA/G是一方面与抗体结合，另一部位与琼脂糖珠子结合，便于后续分离，至于问题2我就不清楚了 再看看别人怎么说的 。
6、免疫共沉淀技术   ? 免疫共沉淀是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法 。其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G，若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗性蛋白抗体—Protein A或G”，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开 。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白 。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高 。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档 。优点 （）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物 。缺点 （）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性 。（4）灵敏度没有亲和色谱高 。注意事项 () 确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定 。免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法 。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法 。（ h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白 ??免疫共沉淀 酶抑制剂），冰上裂解 min后取上清；（°C缓慢摇晃孵育过夜；（,）将预处理过的μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中h，使抗体与protein A琼脂糖珠偶连；（,ml裂解缓冲液洗×SDS 上样缓冲液，沸水煮）细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP）使用对照抗体：单克隆抗体：正常小鼠的IgG或另一类单抗兔多克隆抗体：正常兔IgG

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